Brefeldin A是一种天然二环内酯类抗生素,可由青霉属真菌Penicillum brefeldianum等代谢产生。该化合物具有抗真菌、抗肿瘤、抗病毒、抗有丝分裂等多种生物活性。因其能阻断蛋白质的分泌,Brefeldin A也被广泛用于细胞内细胞因子的检测分析。
Brefeldin A应用于mRNA疫苗有效性评价
对抗原特异性T细胞内细胞因子进行分析是测定疫苗有效性的一种重要方法。对于mRNA疫苗,可以对效应细胞CD4+、CD8+T细胞在抗原特异性刺激下细胞内的细胞因子产生进行分析,特别是IFN-γ、TNF和IL-2。
采用Brefeldin A处理免疫细胞2~12小时,可以使细胞内细胞因子产生后不会分泌出来,而是积聚在细胞内,从而实现更好的检测。在此孵育过程中,可用各种抗原刺激细胞, 例如疫苗的肽段,以衡量免疫反应。部分人胞内细胞因子检测刺激方案可见下表。
采用Brefeldin A处理后,对细胞进行活性标记和细胞表面标记染色,然后进行固定和透化,再用抗细胞因子抗体进行细胞内染色。通过检测细胞内细胞因子染色来实现对细胞内细胞因子的分析。如使用的Brefeldin A活性不够或激活剂配置不当,容易出现无胞内染色的情况,影响实验结果。
Brefeldin A其它应用
Brefeldin A是ATP酶的抑制剂,也是潜在的抗肿瘤药物,能使多发性骨髓瘤(U266,NCI-H929)、JURKAT、HeLa细胞、白血病(HL60,K562,BJAB)、结肠(HT-29)、前列腺及腺样囊性瘤细胞发生凋亡。